Fundamentos da Engenharia Genética

A engenharia genética permite manipular directamente os genes de determinados organismos com objectivos práticos.


Tecnicas do DNA recombinante (rDNA)

1º- Enzimas de restrição: Aplicam-se no vector ( Plasmideo ou Bacteriófagos) e no DNA de origem (que contém o gene de interesse)


2º- Coloca-se o vector e o gene em contacto, usam-se ligases de DNA para promover a ligação


3º- Promover a incorporação do vector por parte das bactérias. (Crescimento num meio de cultura seleccionado)


4º- Seleccionar as bactérias que incorporam o vector: Crescimento em meio de cultura com pressão selectiva. (ex: antibiótico)


5º- Purificação- separação do composto de interesse de outros produzidos pelo metabolismo normal do hospedeiro.




Sintetizando:
























Tecnicas do DNA complementar (cDNA)



Obtenção de cópias de genes que codificam produtos com interesse. Torna possível a produção de de proteínas humanas por procariontes que podem ser cultivados em biorreactores.



Nesta tecnica utilizamos:

• mRNA maduro


• Transcriptase madura: que usa o mRNA como molde para fazer uma cadeia de DNA por complementaridade de bases. (mRNA degrada-se )


• Nucleótidos


• DNA Polimerase: usa-se a cadeia simples e os nucleótidos do meio para sintetizar a cadeia em falta.


• Promove-se a replicação


• Insere-se no vector

Sintetizando:

Tecnicas:

• DNA Recombinante (rDNA) - Técnica mãe
• DNA Complementar (cDNA)
• PCR
• Bibliotecas de genes

Enzimas:

• E Restrição
• Transcriptase reversa
• DNA polimerase